細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠膀胱平滑肌細胞【MouseBladder：NormalBladderSmoothMuscleCells】
產(chǎn)品描述：小鼠膀胱平滑肌細胞分離自正常小鼠膀胱平滑肌組織。膀胱是由平滑肌細胞組成的中空器官。膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液。膀胱平滑肌細胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達與多種病理狀況有關(guān)，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑制人類膀胱平滑肌細胞的增殖，膀胱平滑肌細胞的分化依賴于膀胱上皮細胞釋放的因子。膀胱平滑肌細胞外基質(zhì)的分泌表型可通過細胞所經(jīng)歷的機械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進展的重要一步。公司提供的小鼠膀胱平滑肌細胞，采用膠原酶消化制備而來。細胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠膀胱平滑肌細胞培養(yǎng)試劑盒(MouseBladderPrimaCell:NormalBladderSmoothMuscleCellsCatNo.3-4267)來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞（如脂肪細胞、纖維細胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠膀胱平滑肌細胞傳10代以上仍可以保持原代細胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到小鼠膀胱平滑肌細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細胞;M6194-甲氧基-4'-硝基芪(>98.0%(GC))4-Methoxy-4'-nitrostilbene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

敘利亞倉鼠肌肉細胞;GH-M1 豬髖動脈內(nèi)皮細胞，PIEC細胞 CRL-1548細胞，大鼠肝癌細胞5-硝基尿嘧啶(>99.0%(HPLC)(T))5-Nitrouracil質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)(T)

人羊膜細胞;HA2-羥基阿托伐他汀單鈉鹽二水合物2-Hydroxy Atorvastatin Dihydrate Mono Salt

CD68 Others Human 人 CD68 / Macrosialin / Gp110 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿托伐他汀內(nèi)酯Atorvastatin Lactone

荷蘭白花奶牛牛肺細胞;DCL1阿托伐他汀 ?；?/span>-β-D-葡萄糖醛酸苷 70%, 含 30% 內(nèi)酯Atorvastatin Acyl-β-D-glucuronide 70%, contains up to 30% lactone
大鼠頜下腺上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL羥基脫氫硝苯地平羧酸鹽Hydroxydehydro Nifedipine Carboxylate

MCA38小鼠結(jié)腸癌細胞 MCA38 mouse colon cancer cells DMEM+10%FBS尼莫地平-d7Nimodipine-d7

NRG4 Protein Human 重組人 NRG4 蛋白奧洛他定N氧化物Olopatadine N-Oxide

PA319(人大腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 食管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)奧洛他定鹽酸鹽-d6Olopatadine-d6 Hydrochloride

少突膠質(zhì)前體分化生長添加物OPCDS外消旋去乙基奧昔布寧鹽酸鹽rac Desethyl Oxybutynin Hydrochloride
RNASE1 Others Human 人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 人細胞裂解液 (陽性對照) D-NorleucineD-正白酸1克BR，98%

骨髓間質(zhì)干細胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cells煌綠乳糖膽鹽肉湯 Brillicnt Grqqn Lcctosq Bilq Broth

HME1細胞，人色素瘤細胞 長雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;Mao3,3',5,5'-四甲基聯(lián)... 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine HCl (≥... 207738-08-7 100MG 染色劑

U14-GFP(小鼠子細胞) 5×106cells/瓶×2D-Asparticaciddimetxylesterxy7nochlorideD-天門冬酸10克BR，98%

HuH-6(人肝母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 RBE, 人肝膽管癌細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0906L-Malicacid 10g/25g/100g/500g原裝 Sigma M1000
小鼠膀胱平滑肌細胞BMPR1A Others Human 人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酯shēng huà shì jì容量：100克

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY09115-拂尿嘧啶 5-Fluorourccil;5-FluoropyriMidinq-2,4-dionq;2,4-Dioxo-5-FluoropyriMidinq;5-Fluoro-2,4(1H,3H)-pyriMidinqdionq;2,4-Dixy7noxy-5-fluoropyriMidinq 1921/1/8

PTH Others Human 人 PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酸鎘shēng huà shì jì容量：RT10克

SD大鼠神經(jīng)干細胞 Neural stem cells in SD rat錄化鈉血瓊脂基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：150毫升

SP20細胞，人骨肉瘤細胞 圓弧青霉 人肺成纖維細胞;HFL1PVP-40 25g/1kg原裝 Sigma PVP40