細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞【MouseBrain:NormalCerebralVascularEndothelialCells】
產(chǎn)品描述：小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞的主要功能是維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡，合成和分泌細胞因子和介質(zhì)，維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡。公司提供的小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞,采用胰酶消化制備而來。細胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)試劑盒(MouseBrainPrimaCell:NormalCerebralVascularEndothelialCellsCatNo.3-4421)來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞（如脂肪細胞、纖維細胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人內(nèi)殼細胞(HHirSC)( 5×105 )Trt-dUTrt-dU質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CL-0447SW 1353(人骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì))N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)

人細胞;Hela 229 [HeLa229] 大鼠主動脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLN-三苯甲基洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì)H)N-Trityl Losartan (Losartan Impurity H)

P815 小鼠肥大細胞癌細胞洛沙坦-d3Losartan-d3

PI3 Others Human 人 Elafin / WFDC14 / appin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 羧酸洛沙坦Losartan Carboxylic Acid
TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 人細胞裂解液 (陽性對照) 維生素B2（標準品）vitamin B2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品

CM-M005小鼠氣管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mL核黃素,維生素B2vitamin B2質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

KYSE 450細胞，人食管鱗癌 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞,CRT細胞 家兔腎細胞;RABK3維生素D2（標準品）vitamin D2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品

CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞) 5×106cells/瓶×2磺胺異噁唑(標準品)Sulfisoxazole質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

PECAM1 Others Human 人 CD31 / PECAM1 人細胞裂解液 (陽性對照) 膠蒼術(shù)甙，羧基蒼術(shù)苷二鉀鹽(標準品)Carboxyatractyloside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
非洲綠猴腎細胞;Vero E6奧氮平硫代內(nèi)酰胺雜質(zhì)Olanzapine Thiolactam Impurity

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞2-羥甲基奧氮平2-Hydroxymethyl Olanzapine

人B細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1) 大鼠胰腺星狀細胞完全培養(yǎng)基 100mLN-去甲基奧氮平N-Demethyl Olanzapine

視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-氧基奧氮平Olanzapine N-Oxide

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 氨1汀硫醇二鹽酸Amifostine Thiol Dihydrochloride
小鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞HGF Protein Mouse 重組小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白十八烷基基錄化shēng huà shì jì容量：10克

小小腦星形膠質(zhì)細胞(MA-c)(5×105) MG-63, 人骨肉瘤細胞 HumanL-酪酸二鈉 L-Tyrosine di salt (HPLC,≥98%) 69847-45-6 5G 通用試劑

大鼠肺泡上皮細胞RPAEpiC加醋異炳酯 Isopropyl forMctq;ForMic ccid isopropyl qstqr 62-22-8

ENPP2 Others Mouse 小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 人細胞裂解液 (陽性對照) 對稱二本基偶氮羰酰shēng huà shì jì容量：RT5克

HEL2 人胚胎肺成纖維細胞(女)2550-26-74-本基-Benzyleetone