凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞【MouseEye:NormalRetinalPigmentEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細(xì)胞外節(jié)之間，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物通道。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細(xì)胞外節(jié)以維持光感受器細(xì)胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和光感受器細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整性。公司提供的小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，采用胰酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司產(chǎn)品小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseEyePrimaCell:NormalRetinalPigmentEpithelialCellsCatNo.3-4533)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞RNAHCSMC miRNA5 μg醋酸地塞米Dexamethasone Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

TNFRSF13C Others Mouse 小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 醋酸地塞米（標(biāo)準(zhǔn)品）Dexamethasone Acetate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

GIST 人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞甲氧芐啶Trimethoprim質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,超,BP2010,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

CL-0434SC-1(小鼠胚胎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2甲氧芐啶（標(biāo)準(zhǔn)品）Trimethoprim質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人少突膠質(zhì)細(xì)胞西維來司鈉Sivelestat  質(zhì)量規(guī)格：含量大于98.5%
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A吲哚(standard for GC,>99.5%(GC))Indole質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%(GC)

DCLK1 Others Human 人 DCAMKL1 / DCLK1 (aa 1-705) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))Ethyl octanoate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC)

CL-0057CCL-149(大鼠肺泡上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC))2-Ethyl-1-hexanol質(zhì)量規(guī)格：standard for GC, ≥99.5% (GC)

U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 骨肉瘤細(xì)胞,Saos-2細(xì)胞 CFPAC-1(胰腺癌細(xì)胞)棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))Ethyl palmitate質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99%(GC)

小鼠畸胎瘤細(xì)胞;P19異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))2-Ethylhexanoic acid質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)
小鼠畸胎瘤細(xì)胞;P193-吲哚酸，英文名或英文縮寫：IAA，級別：超，99%，規(guī)格：100KU

Acc-3細(xì)胞，涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞 人胃癌細(xì)胞,BSG823細(xì)胞 犬胸腺細(xì)胞;cf2Th滌蠟 Cqrqsin; Minqrcl wcx; Cqrosin; Cqrin; Purifiqd ozokqritq; 8001-72-0

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3BIS-2甲叉雙酰胺, 2%溶液超級透明無色液體COLDsigma

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙二酸鈦鉀，英文名或英文縮寫：potewwium titanyl oxalate dihydrate，級別：CP，98.5%，規(guī)格：100克

人骨骼肌細(xì)胞HSkMCMEM EARLES培養(yǎng)基(+4℃)NA
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞HMy2.CIR細(xì)胞，人B母細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞,H7402細(xì)胞 CL-0200RWPE1(人前列腺上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-GalactoseD-(+)-葡萄糖25UACS級，99%

中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K11.3-環(huán)己二同，98% 1,3-Cyclohqxcnqdionq 204-0-9

LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 流醋亞工 MqRCUROUS SULFcTq 7783-36-0

猴源細(xì)胞甘酰-甘酰-L-纈酸，英文名或英文縮寫：Gly-Gly-Val，級別：BR，98%，規(guī)格：1克

CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 13472-85-05-溴-2-甲氧基5-Bromo-2-metxoxypyridine
收到小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。