操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞【MouseSkin:NormalEpidermalKeratinocytes】
產(chǎn)品描述：小鼠表皮角化細(xì)胞主要分布于表皮基底層，在上皮程序性死亡后，細(xì)胞產(chǎn)生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的表皮角化細(xì)胞容易導(dǎo)致終末分化，不能充分增殖。表皮覆蓋皮膚和粘膜表面，作為機(jī)體抵抗外界刺激的第一道防御性屏障，具有其他器官不可替代的重要生理功能。角質(zhì)形成細(xì)胞可產(chǎn)生粘附分子和細(xì)胞因子，與天然免疫和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)相關(guān)。公司提供的小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，采用胰蛋白酶法制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseSkinPrimaCell:NormalEpidermalKeratinocytesCatNo.3-4547)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLD-綿子糖五水；蜜三糖五水D(+)-Raffinose pentahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

B95-8細(xì)胞，產(chǎn)EBV的絨猴白細(xì)胞 A549(人肺腺癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1D-泛酸鈣,維生素B5D-Calcium Panthotenate(Vitamin B5)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EFNA5 Protein Human 重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)脫羧氯雷他定/地氯雷他定Desloratadine質(zhì)量規(guī)格：>98%

HEL(人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)脫羧氯雷他定/地氯雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品)Desloratadine質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)地塞米1酸鈉Dexamethasone  Phosphate質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP
CM-R098大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL托吡酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Topiramate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

KYSE510細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,U87MG細(xì)胞 鼬肺上皮細(xì)胞;MV-1-LuVX-680/MK0457，陶扎色替Tozasertib，VX-680/MK-0457質(zhì)量規(guī)格：>99%,pan-Aurora抑制劑

CHO(倉鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2曲司氯銨Trospium chloride 質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6,BR

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) AG-014699AG-014699質(zhì)量規(guī)格：>98%

小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Sp2/0-Ag14卡非佐米Carfilzomib/PR171質(zhì)量規(guī)格：>98.5%
TNF Protein Rat 重組大鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白對本二酚shēng huà shì jì容量：100毫克

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVVEC)( 5×105 ) SK-MEL-1, 人皮膚色素瘤細(xì)胞 Human古洛糖 L-Gulose,98% 6027-89-0 100MG 通用試劑

人胚胎心肌組織來源細(xì)胞;CCC-HEH-2羌基三基醋酯 xy7noXYPIVcLIC cCID MqTHYL qSTqR 1400-80-3

IL17A Others Human 人 IL17 / IL17A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 10ml離心管shēng huà shì jì容量：25KU

CL-0285L-O2(人正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×213057-19-7甲基IODOmetxYL metxYL
小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞CTSS Others Human 人 CTSS / Cathepsin-S 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Fibrinogenfromhumanplasma血漿凝固因子250毫克BR，5-10u/mg

豹貓肌肉成纖維樣細(xì)胞;LCM4溴酚紅;二溴酚磺酞 BroMophqnol rqd;BPR 800-80-8

S100A4 Others Mouse 小鼠 S100A4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 印度墨水 India ink (certified by the Biological... Null 100ML 染色劑

腦膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)DL-OrnithineHCLDL-2,5-二基戊酸單鹽酸鹽1克BR，99%

HEPA1-6細(xì)胞，小鼠肝癌細(xì)胞 人卵巢癌細(xì)胞,OVCaR-3細(xì)胞 人膀胱平滑肌細(xì)胞裂解物HBdSMCLlitxiumChloride,8M 100ml 進(jìn)口原料自產(chǎn)
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。