人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物【Human Coronary Artery: Normal Aortic Endothelial cells Derivatives】
產(chǎn)品描述：人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物是從人原代冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取的，人原代冠狀動脈內(nèi)皮細胞從正常人冠狀動脈內(nèi)皮組織制備。正常人冠狀動脈內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：CL-0337FO(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2沒食子兒茶素沒食子酸酯（標準品）GCG;(?)-Gallocatechin gallate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL表告依春（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Epigoitrin

TE671 subline No.2細胞，人橫紋肌肉瘤細胞 化膿性鏈球菌 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細胞;15P-1表沒食子兒茶素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品(?)-Epigallocatechin/EGC

CCL4 Protein Human 重組人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 標簽)表小檗堿（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Epiberberine

LS-174T(人結(jié)腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRNP / Prion 人細胞裂解液 (陽性對照) 濱蒿內(nèi)酯（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Scoparone

兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-1變色酸鈉,鉻變酸二鈉質(zhì)量規(guī)格：ARChromotropic acid di salt dihydrate
人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物小鼠皮下脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mLPROTEINASSAYBRADFORDmetxODBRADFORD法蛋白檢測試劑盒生物技術(shù)級COLDsigma

L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠瘤細胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C) in mouse lymphoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS1-(2-偶氮)-2-... 1-(2-Pyridylazo)-2-naphthol,98% 85-85-8 5G 通用試劑

IL17A Protein Marmoset 重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白炳三醇炳氧基化物-block-氧基化物 GLYCqROL PROPOXYLcTq-B-qTHOXYLcTq 908-00-

人腦膜細胞 (HMC)( 5×105 ) 細胞名稱 NCI-N87 [N87]人胃癌細胞DPG雙甘醇1克CP，95%

CM-R009大鼠肺大靜脈平滑肌細胞完全培養(yǎng)基100mL69898-45-9洛嗪wo7ium 3-(pyridin-2-yl)-1,2,4-tri-5,6-diyl]bis(benzene-4,4'-sulphonate) hydrate
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。