人脂肪細(xì)胞提取物【Human Fat: Normal Adipose Cells Derivatives】
產(chǎn)品描述：人脂肪細(xì)胞提取物是從人原代脂肪細(xì)胞提取的，人原代脂肪細(xì)胞從正常人脂肪組織制備。正常人脂肪組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到人脂肪細(xì)胞提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
牛誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒 Bovine Inducible Niic Oxide Syhase,iNOS ELISA Kit 甲氧基 HPLC≥98% 5mg

牛孕激素/孕酮(PROG)試劑盒 Bovine progesterone,PROG ELISA Kit 甲氧基當(dāng)歸素 HPLC≥98% 5mg

牛載脂蛋白B100(Apo-B100)試劑盒 Bovine apolipoprotein B100,Apo-B100 ELISA Kit 甲氧呋豆素 HPLC≥98% 5mg

牛脂蛋白脂酶(LPL)試劑盒 Bovine lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit 甲氧芐啶乳酸鹽  Trimethoprim lactate salt 

牛脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)試劑盒 Bovine lipopolysaccharide binding protein,LBP ELISA kit 甲氧芐啶（標(biāo)準(zhǔn)品）  Trimethoprim  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

牛脂聯(lián)素(ADP)試劑盒 Bovine adiponectin,ADP ELISA Kit 甲氧芐啶 HPLC≥98% 100mg

牛脂酰輔酶A合成酶試劑盒 Bovine acyl-CoA syhase ELISA kit 甲氧芐啶  Trimethoprim  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,超,BP2010,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

Cephalomannine

分子式：C45H53O14

分子量：831.91

CAS號：71610-00-9

檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98%

規(guī)格：20mg50mg100mg500mg1g (可根據(jù)客戶需求包裝)

性狀： 本品為白色結(jié)晶

作用與用途：本品用于含量測定。

提取來源：本品為紅豆杉科植物紅豆杉（T.YUENNAN ENSIS CHENG ET L.K.FU）的皮。

藥理性質(zhì)：

熔點230～233℃，溶于乙醇、二氯等，微溶于等

用法：

色譜條件：流動相：-乙睛-水(20:30:50),檢測波長227 nm,柱溫30℃（僅供參考））

貯藏方法：

2-8°C，避光保存。
人脂肪細(xì)胞提取物小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SI1)ELISA試劑盒 ，英文名： SI1 ELISA Kit 氯化鎂銨,氯化銨鎂,六水合氯化鎂銨  AMMoniuM MagnesiuM chloride  質(zhì)量規(guī)格：CP

小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白6(SI6)ELISA試劑盒 ，英文名： SI6 ELISA Kit 訶子林鞣酸  Chebulinic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞激活蛋白α(FAPα)ELISA試劑盒 ，英文名： FAPα ELISA Kit 訶子鞣質(zhì),訶子鞣酸  Chebulagic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF10 ELISA Kit 劍麻皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)  Tigogenin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子11(FGF11)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF11 ELISA Kit 蟛蜞菊內(nèi)脂;蟛蜞菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Wedelolactone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子12(FGF12)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF12 ELISA Kit 甜橙黃酮  Sinensetin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF13)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF13 ELISA Kit 白屈菜堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Chelidonine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF-13 ELISA Kit 葫蘆素D;葫蘆苦素D  Cucurbitacin D  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子15(FGF15)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF15 ELISA Kit 白頭翁皂苷A3(標(biāo)準(zhǔn)品)  Anemoside A3  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子18(FGF18)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF18 ELISA Kit 黃花敗醬甙C;牡丹草苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)  Scabioside C  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。