人冠狀動脈組織提取物【Coronary Artery: Normal Human Coronary Artery Derivatives】
產(chǎn)品描述：冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。公司科技提供來自新鮮或冷凍人冠狀動脈組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人冠狀動脈組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠前列腺素E代謝物(PGEM)試劑盒 Rat Prostaglandin E Metabolite,PGEM ELISA Kit 霉酚酸酰基 β-D-葡萄糖苷酸  Mycophenolic Acid Acyl-β-D-glucuronide 

大鼠前列腺素F(PGF)ELISA檢測試劑盒ratProstaglandinF,PG-FELISAKit 96T/48T 霉酚酸?；?/span> β-D-葡萄糖苷  Mycophenolic Acid Acyl-β-D-glucoside 

大鼠前列腺素F(PGF)試劑盒 Rat Prostaglandin F,PGF ELISA Kit 霉酚酸內(nèi)酯 (EP 雜質(zhì)H)  Mycophenolic Acid Lactone (EP Impurity H) 

大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA檢測試劑盒RatProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit 96T/48T 霉酚酸β-D-葡萄糖苷酸  Mycophenolic Acid β-D-Glucuronide 

大鼠前列腺素F2α(PGF2α)試劑盒 Rat Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit 霉酚酸-d3 β-D-葡萄糖苷酸  Mycophenolic Acid-d3 β-D-Glucuronide 

大鼠前列腺素F2α受體(PTGFR)試劑盒 Rat Prostaglandin F2-alpha receptor,PTGFR ELISA kit 霉酚酸; 麥考酚酸;MPA  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠前列腺素F合成酶(PGFS)試劑盒 Rat prostaglandin F syhase,PGFS ELISA Kit 霉酚酸; 麥考酚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Mycophenolic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠前列腺素H2(PGH2)試劑盒 Rat Prostaglandin H2,PGH2 ELISA Kit 玫紅酸(指示劑級)  Rosolic acid  質(zhì)量規(guī)格：指示劑級

大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)ELISA檢測試劑盒RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit 96T/48T 玫紅酸(AR)  Rosolic acid  質(zhì)量規(guī)格：AR

大鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒 Rat Prostatic Acid Phosphatase,PAP ELISA Kit 玫瑰紅酸鈉  Rhodizonic acid  salt  質(zhì)量規(guī)格：AR
動物源性食品山羊源試劑盒20 替比夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)  telbivudine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

RatVitaminB6,VB6ELISA試劑盒大鼠維生素B6(VB6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 輪環(huán)藤寧/1,4,7,10- 四氮雜環(huán)十二烷   Cyclen/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane  質(zhì)量規(guī)格：含量≥99%（GC）

小鼠溶酶體酸性0酸酶2(ACP2)ELISA試劑盒 ，英文名： ACP2 ELISA Kit 雷替曲塞  Raltitrexed  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

豬生長激素(GH)ELISA檢測試劑盒Porcinegrowthhormone,GHELISAKit 96T/48T L-鳥氨酸 L-天門冬氨酸鹽  L-Ornithine L-aspartate salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%

大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)試劑盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit 雙嘧達(dá)莫  Dipyridamole  質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP

英文名稱HumanIL-18ELISAKIT人白介素-18(IL-18)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 他米巴羅汀  Tamibarotene  質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%

動物源性食品鼠源試劑盒20 文多靈  Vindoline  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RatVitaminC,VCELISA試劑盒大鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 羅丹明B；玫瑰紅B  Rhodamine B  質(zhì)量規(guī)格：BS

小鼠溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒 ，英文名： LZM ELISA Kit 頭孢哌酮;頭孢哌酮酸  Cefoperazone Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA檢測試劑盒Mousesolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAkit 96T/48T 頭孢哌酮(標(biāo)準(zhǔn)品)  Cefoperazone Acid  質(zhì)量規(guī)格：含量測定
人冠狀動脈組織提取物PorcineSuperOxidaseDimase,SODELISA試劑盒豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 毛葉香茶菜丁素 HPLC≥98% 5mg

盒規(guī)格：96T/48T 穆茱萸內(nèi)酯醇 HPLC≥98% 5mg

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。