小鼠胎兒表皮組織提取物
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品牌 谷研
產(chǎn)品名稱 小鼠胎兒表皮組織提取物
英文名稱 Embryo: Normal Mouse Fetal Epidermal Derivatives
貨號 GOY-Y6954
規(guī)格 詳見說明書
商品介紹

參數(shù)規(guī)格:
小鼠胎兒表皮組織提取物Embryo: Normal Mouse Fetal Epidermal Derivatives
產(chǎn)品描述:表皮組織是由胚胎時期外胚層形成,具有抗摩擦和抗損傷的作用。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠胎兒表皮組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。             

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質量。     

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin),離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。            潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

產(chǎn)品名稱

小鼠胎兒表皮組織提取物

英文名稱

Embryo: Normal Mouse Fetal Epidermal Derivatives

貨號

GOY-Y6954


凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(或隔夜)液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2
)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。      
1.
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2.
1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3.
6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4.
將細胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3
)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1.
細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm
離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3.
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

收到小鼠胎兒表皮組織提取物如何處理?產(chǎn)品僅供科研使用
1
、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2
、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3
、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4
、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5
、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6
、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C111酸氫鈣二水(>98%,BR)質量規(guī)格:>98%,BRCalcium phosphate, dibasic, dihydrate

XCL2 Others Human XCL2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 碳酸鈰質量規(guī)格:>99.9%,ARCerium(III) carbonate, hydrate

CM-R118大鼠虹膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL文多靈質量規(guī)格:>98%,BRVindoline

HNE2, 人鼻咽癌細胞系 NIH SWISS小鼠胚細胞,NIH3T3細胞 A673(橫紋肌瘤細胞)羅丹明B;玫瑰紅B質量規(guī)格:BSRhodamine B

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L1頭孢哌酮;頭孢哌酮酸質量規(guī)格:>98%,BRCefoperazone Acid
人腎近曲小管上皮細胞總RNAHRPTEpiC NA苦玄參苷X(標準品)Picfeltarraenin X質量規(guī)格:HPLC97%,標準品

BST1 Others Rat 大鼠 CD157 / BST1 人細胞裂解液 (陽性對照) 豆甾醇葡萄糖苷(標準品)Stigmasterol glucoside質量規(guī)格:HPLC98%,標準品

人滑膜細胞完全培養(yǎng)基 100mL新霉胺(標準品)Neamine 質量規(guī)格:檢查

CHO-pt細胞,轉血小板基因倉鼠卵巢細胞 L6(大鼠成肌細胞) 615小鼠癌瘤株;Ca761醌式利福平(標準品)RIFAMPIN QUINONE 質量規(guī)格:HPLC法有關物質檢查

EFNA4 Protein Human 重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 標簽)3-甲酰利福霉素SV(標準品)Rifamycin質量規(guī)格:含量
小鼠胎兒表皮組織提取物非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A 人肺癌細胞,NCI-H838[H838]細胞 BGC-823(胃腺癌細胞(低分化))wo7iumdodecylbenzenesulfonate十二烷基本磺酸鈉-61FMP

人橫紋肌肉瘤細胞;A-204鱗醋吡哆全 3-xy7noxy-2-mqthyl-5-([phosphonooxy]mqthyl)-4-pyridinqccrboxcldqhydq 823642--4

IL3RA Others Human IL3RA / CD123 人細胞裂解液 (陽性對照) SarcosineetxylesterHC1N-甲基基乙酸乙酯鹽酸鹽1BR99%

CM-H022人前列腺成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mLPONCEAUSSTAIN麗春紅S (猩紅S)蛋白組學級紅色,無混濁液體RTsigma

BBOX1 Others Human BBOX1 / Gamma-BBH 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 7646-85-7錄化鋅Zinc chloride

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