操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。產(chǎn)品僅供科研使用
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

大鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物【Coronary Artery：Normal RatCoronary Artery Derivatives】
產(chǎn)品描述：動(dòng)脈是由心室發(fā)出的血管。冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍大鼠冠狀動(dòng)脈組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：產(chǎn)品僅供科研使用
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/4664T/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸甲氧那明Methoxyphenamine HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,CP

人肺泡上皮細(xì)胞HPAEpiC安息香甲基(>98.0%(GC))Benzoin Methyl Ether質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 安息香異丁基(>95.0%(GC))Benzoin Isobutyl Ether質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

KM9304 EBV-轉(zhuǎn)化人細(xì)胞(彝族)2,2-二乙氧基苯乙酮(>95.0%(GC))2,2-Diethoxyacetophenone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

CM-H099人真皮上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL2,2-二甲氧基-2-乙酮(>98.0%(GC))2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
CD274 Others Human 人 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸黃酮哌酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Flavoxate hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

原代成纖維細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml3-甲基黃酮-8-羧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）3-Methylflavone-8-carboxylic acid質(zhì)量規(guī)格：供檢查用

PKM Others Mouse 小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸番茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Tomatidine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0902鹽酸頭孢唑蘭Cefozopran hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1 胚肺成纖維細(xì)胞，HFL-I細(xì)胞 IEC-6細(xì)胞，大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞阿嗪米特（標(biāo)準(zhǔn)品）Azintamide質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
大鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)麥芽浸出粉100克

斑馬魚尾鰭細(xì)胞;AB.9 人肝癌細(xì)胞，SNU-182細(xì)胞 HEp-2(喉表皮樣癌細(xì)胞)皇區(qū)每讀速 G2(+4℃) cFLcTOXIN G2 741-98-7

人腦瘤細(xì)胞;SF126N-2--N'-... HEPES (≥99.5%) 7365-45-9 25G 通用試劑

TLR3 Others Mouse 小鼠 TLR3 / CD283 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DFSDNAPOLYMERASE500UDFS-TAQ DNA 聚合酶500 UnitsFrozen

非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO(過(guò)銨)
注意事項(xiàng)：
1. 接收到大鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。