mRNA的分離與純化是研究細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平與cDNA文庫(kù)構(gòu)建 的重要步驟，mRNA的質(zhì)量直接影響cDNA的合成效率。接下來(lái)我們就介紹一下mRNA的分離與純化，包括實(shí)驗(yàn)步驟、注意事項(xiàng)與時(shí)間安排，供大家參考。

1.實(shí)驗(yàn)步驟

1.1.裝柱與平衡柱子

1.2.柱上吸附poly(A+) RNA

1.3.從柱中洗脫poly(A+)RNA

1.4.從柱中洗脫poly(A+)RNA

1.4.Oligo(dT)-纖維素再生

今天就讓一款 mRNA 的新型純化工具包，即從親和到反相的 色譜工具包，帶你在疫苗研發(fā)的舞臺(tái)上乘風(fēng)破浪！


關(guān)于 mRNA 及整體柱
mRNA 具有大分子質(zhì)量，也對(duì)剪切力敏感。
整體色譜柱的大通道結(jié)構(gòu)允許大分子自由進(jìn)入，并且層流可防止剪切力損傷。
整體柱結(jié)構(gòu)能夠純化高達(dá) 10 kb 或更大的 mRNA。


mRNA 豐富的化學(xué)性質(zhì)是純化色譜柱多樣化選擇的基礎(chǔ)。
mRNA 含有帶電的磷酸酯主鏈和具有氫鍵能力的疏水核苷酸殘基。

電荷相互作用，氫鍵和其他分子作用力也帶來(lái)了挑戰(zhàn)。
mRNA 充當(dāng)成核中心，并容易與IVT混合物中的其他組分形成締合。
這些雜聚體降低了傳統(tǒng)已知純化方法（包括過(guò)濾，沉淀和色譜法）的容量，回收率和純化能力。

BIA Separations 可以提供，專(zhuān)用于大分子純化的創(chuàng)新型層流設(shè)計(jì)整體柱，mRNA 純化工具包，靈活、快速、方便地使用整體色譜柱，以獲得您所需的高質(zhì)量產(chǎn)品。

工具包概述


CIM 技術(shù)提供了功能獨(dú)特的純化工具包，可用于快速過(guò)程開(kāi)發(fā)和規(guī)模擴(kuò)大：

• 產(chǎn)品具有完整的 poly（A）尾

• dsRNA 和 DNA template 被去除

• 去除了與過(guò)程和產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)，如酶、DNA 和 RNA 片段

一、CIMmultus Oligo dT
提供了 mRNA 的一步親和捕獲。
通過(guò)氫鍵結(jié)合，oligo dT 與目標(biāo)物的末端 poly(a) 序列形成穩(wěn)定的雜化結(jié)合。
樣品上樣期間，非 RNA 污染物流穿色譜柱。

二、CIMmultus C4 HLD
是疏水性層析整體，用于純化核酸。
樣品以高離子強(qiáng)度應(yīng)用于沉淀 RNA 的鹽中。
大多數(shù) DNA，dsRNA 和 short transcripts 的洗脫時(shí)間要早于完整的 ssRNA。
通常通過(guò) NaOH 清洗步驟洗脫蛋白質(zhì)和聚集體。

三、CIMmultus PrimaS
在室溫和水相條件下純化大單鏈 mRNA（ssRNA）。
可以用于拋光或高分辨率捕獲方法。
可以去除 dsRNA，DNA，蛋白質(zhì)和內(nèi)毒素，同時(shí)按大小遞增的順序?qū)?ssRNA 進(jìn)行分級(jí)分離。


四、CIMmultus SDVB
是用于純化 ssRNA 的基于苯已烯已烯基苯的反相色譜柱。
DNA，dsRNA 和 ssRNA 根據(jù)長(zhǎng)度進(jìn)行分級(jí)。
長(zhǎng)度相似的雙鏈和單鏈物質(zhì)分離的選擇性受堿基配對(duì)程度的影響

SDVB 和 PrimaS 可用于評(píng)估。

五．定制專(zhuān)屬于你的固定相配體
我們的研發(fā)可以固定定制的寡核苷酸序列，蛋白質(zhì)或酶。

• 定制和專(zhuān)有的寡核苷酸序列可以提高產(chǎn)物的純度，并且可以固定在整體基質(zhì)上。

固定化酶可以減少酶的使用和成本，酶的去除步驟，并提高消化效率。

如果您想進(jìn)一步了解 mRNA 純化包或定制產(chǎn)品的更多信息，歡迎隨時(shí)與我們聯(lián)系！