武漢思特進科技發(fā)展有限公司主營：動植物，細菌，細胞生物實驗
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FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被 熒光物質(zhì)標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是 熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中較常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及 基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

原位雜交技術(shù)基本原理

原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。

為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標記物。

雜交流程

雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動力學(xué)和熱穩(wěn)定性。雜交液的基礎(chǔ)成分為：Denhardt’s溶液（Ficoll，BSA，PVP），異源核酸（如鯡精3子DNA/tRNA/競爭DNA），磷酸鈉，EDTA，SDS，鹽離子，甲酰胺和硫酸葡聚糖，以及雜交探針。不同的應(yīng)用中進行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優(yōu)化。常用的pH范圍為6.5~7.5，較高的pH值有助于提高雜交的嚴謹性。