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武漢思特進科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測
上海原位雜交電話-湖北原位雜交-原位雜交
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就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。
Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴增的方法,可以更方便地進行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗證其對目標(biāo)片段檢測的靈敏度和特異性。
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雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩(wěn)定性,較高的鹽濃度將增加雜交體的穩(wěn)定性。大于0.4M的Na離子濃度,對Tm值、雙鏈復(fù)性速率的影響不大,但隨著Na離子濃度的降低,將顯著影響Tm值和雙鏈復(fù)性速率。
有2機溶2劑(甲酰胺)的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等雙鏈體的解鏈溫度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的條件下變性,那么應(yīng)用于原位雜交,樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性,這將導(dǎo)致樣品形態(tài)學(xué)的破壞。50%甲酰胺的應(yīng)用能將雜交溫度降至30~45℃。
硫酸葡聚糖具有很強的水合性,高濃度的硫酸葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環(huán)境,增加了探針濃度,加快雜交反應(yīng)速率。
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