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武漢思特進科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測
浙江動物組織原位雜交-湖北動物組織原位雜交電話-思特進
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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面
1.細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。
2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。
3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。
4.基因在染色體上的定位。
5.檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
6.分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳
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雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩(wěn)定性,較高的鹽濃度將增加雜交體的穩(wěn)定性。大于0.4M的Na離子濃度,對Tm值、雙鏈復(fù)性速率的影響不大,但隨著Na離子濃度的降低,將顯著影響Tm值和雙鏈復(fù)性速率。
有2機溶2劑(甲酰胺)的作用是降低DNA-DNA和DNA-RNA等雙鏈體的解鏈溫度。通常DNA需要在0.1~0.2M Na+ 90~100℃的條件下變性,那么應(yīng)用于原位雜交,樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性,這將導(dǎo)致樣品形態(tài)學(xué)的破壞。50%甲酰胺的應(yīng)用能將雜交溫度降至30~45℃。
硫酸葡聚糖具有很強的水合性,高濃度的硫酸葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環(huán)境,增加了探針濃度,加快雜交反應(yīng)速率。
雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10~15℃,堿基順序高度同源的互補鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈,錯配對減少。若反應(yīng)溫度再低(Tm-30℃),雖然互補鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈,但互補堿基配對減少,錯配對增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個同源性在50%左右或更低些的DNA,調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍,因此在實驗前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗,即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對雜交的影響見表18-3。
zui適復(fù)性溫度(Optimunm renaturation temperature, TOR):Tor =Tm –25℃
苛刻復(fù)性溫度:Ts = Tm – (10或15℃)
非苛刻復(fù)性溫度:Tns =Tm – (30或35℃)
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