武漢思特進科技發(fā)展有限公司
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原位雜交檢測-動物組織原位雜交-思特進
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原位雜交是指將特定標記的已知順序核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精0準確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。
原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。
使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。
原位雜交試驗
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗,然后換成甲9醇,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng),可阻斷色素的形成)
原位雜交中探針的選擇
DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應(yīng)進行標記。寡核苷酸探針的長度較短,因此避免了探針內(nèi)部退火的問題,在雜交時的滲透能力也更好,探針與靶標的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度,通常300-1000bp左右,能覆蓋到較長片段的靶核酸序列,增加檢測的靈敏度。