植物組織原位雜交技術(shù) 植物組織原位雜交
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植物組織原位雜交技術(shù)-植物組織原位雜交

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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng):動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng):動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)




多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù),它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交,能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,呈現(xiàn)多種色彩,因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限,能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因,在檢測(cè)遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用(楊明杰等1998)。



原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精3確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。

原位PCR;原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù),在細(xì)胞(爬片、甩片或涂片)或組織(石蠟、冰凍切片)上直接對(duì)靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。



在選用探針時(shí)經(jīng)常會(huì)受到可利用探針?lè)N類的限制。如在建立DNA文庫(kù)時(shí),手頭沒(méi)有篩選特定基因的克0隆探針,這時(shí)就可用寡核苷酸探針來(lái)代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白,并測(cè)定6個(gè)以上的末端氨基酸序列,通過(guò)反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動(dòng)物的同種基因克0隆,因?yàn)槿祟惡蛣?dòng)物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性,因此可利用已鑒定的動(dòng)物基因作探針來(lái)篩選人類基因克0隆。對(duì)于基因核苷酸序列背景清楚而無(wú)法獲得克0隆探針時(shí),可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列,并克0隆人合適的質(zhì)粒載體中,即可得到自己的探針。這種方法十分簡(jiǎn)便,無(wú)論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得,而且,可以建立PCR的基因檢測(cè)方法,與探針雜交方法可作對(duì)比,可謂一舉兩得。



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