武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 檢測(cè)
思特進(jìn)-原位雜交技術(shù)-染色體原位雜交檢測(cè)
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經(jīng)營(yíng)模式
生產(chǎn)加工
所在地區(qū)
湖北省武漢市
主營(yíng)產(chǎn)品
原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精3確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。
原位PCR;原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù),在細(xì)胞(爬片、甩片或涂片)或組織(石蠟、冰凍切片)上直接對(duì)靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。
雜交技術(shù)zui重要的因素之一是選擇zui適的雜交反應(yīng)溫度。若反應(yīng)溫度低于Tm 10~15℃,堿基順序高度同源的互補(bǔ)鏈可形成穩(wěn)定的雙鏈,錯(cuò)配對(duì)減少。若反應(yīng)溫度再低(Tm-30℃),雖然互補(bǔ)鏈之間也可形成穩(wěn)定的雙鏈,但互補(bǔ)堿基配對(duì)減少,錯(cuò)配對(duì)增多、氫鍵結(jié)合的更弱。如兩個(gè)同源性在50%左右或更低些的DNA,調(diào)整雜交溫度可使它們之間的雜交率變化10倍,因此在實(shí)驗(yàn)前必須首先確定雜交溫度。通常有三種溫度可供試驗(yàn),即zui適復(fù)性溫度、苛刻復(fù)性溫度及非苛刻復(fù)性溫度。溫度的選擇及溫度對(duì)雜交的影響見(jiàn)表18-3。
zui適復(fù)性溫度(Optimunm renaturation temperature, TOR):Tor =Tm –25℃
苛刻復(fù)性溫度:Ts = Tm – (10或15℃)
非苛刻復(fù)性溫度:Tns =Tm – (30或35℃)
總的來(lái)說(shuō),隨探針濃度增加,雜交率也增加。另外,在較窄的范圍內(nèi),隨探針濃度增加,敏感性增加。依我們的經(jīng)驗(yàn),要獲得較滿意的敏感性,膜雜交中32P標(biāo)記探針與非放0射性標(biāo)記探針的用量分別為5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位雜交中,無(wú)論應(yīng)用何種標(biāo)記探針,其用量均為0.5~5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度,但受不同類型標(biāo)記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。