武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物，細(xì)菌，細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

原位雜交；原位雜交（in situ hybridization）將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱(chēng)為原位雜交！

使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。

以菌落原位雜交為例：對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行克8隆篩選時(shí)，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期發(fā)展起來(lái)的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類(lèi)產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標(biāo)記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽?biāo)記的探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而對(duì)基因進(jìn)行染色體定位。



在選用探針時(shí)經(jīng)常會(huì)受到可利用探針?lè)N類(lèi)的限制。如在建立DNA文庫(kù)時(shí)，手頭沒(méi)有篩選特定基因的克0隆探針，這時(shí)就可用寡核苷酸探針來(lái)代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白，并測(cè)定6個(gè)以上的末端氨基酸序列，通過(guò)反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動(dòng)物的同種基因克0隆，因?yàn)槿祟?lèi)和動(dòng)物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性，因此可利用已鑒定的動(dòng)物基因作探針來(lái)篩選人類(lèi)基因克0隆。對(duì)于基因核苷酸序列背景清楚而無(wú)法獲得克0隆探針時(shí)，可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列，并克0隆人合適的質(zhì)粒載體中，即可得到自己的探針。這種方法十分簡(jiǎn)便，無(wú)論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得，而且，可以建立PCR的基因檢測(cè)方法，與探針雜交方法可作對(duì)比，可謂一舉兩得。