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原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織或細胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標記物可分為同位素標記探針和非同位素標記探針兩大類。常用的同位素標記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達，有很高的敏感性和特異性，已成為細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

原位雜交技術(shù)應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免6疫組化技術(shù)的結(jié)合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結(jié)合起來。1969年P(guān)ardue和Gall將放9射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克6隆技術(shù)的發(fā)展，及不同探針標記系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)的應用，大大增加了原位雜交檢測的應用靈活性和檢測靈敏度。



總的來說，隨探針濃度增加，雜交率也增加。另外，在較窄的范圍內(nèi)，隨探針濃度增加，敏感性增加。依我們的經(jīng)驗，要獲得較滿意的敏感性，膜雜交中32P標記探針與非放0射性標記探針的用量分別為5～10 ng/ml和25～1000ng/ml，而原位雜交中，無論應用何種標記探針，其用量均為0.5～5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度，但受不同類型標記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。