武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

原位雜交過(guò)程

雜交前可進(jìn)行預(yù)雜交，以防止較高的背景染色。預(yù)雜交條件與雜交條件相同，只是預(yù)雜交液中不含探針和硫酸葡聚糖。

靶DNA的變性（對(duì)mRNA的原位雜交無(wú)需此步）

樣品DNA的變性在DNA-DNA雜交檢測(cè)中是必須的步驟，但同時(shí)可能會(huì)造成樣品形態(tài)學(xué)的部分破壞，此步是實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化的一個(gè)步驟。常用的變性方法為堿變性和熱變性，實(shí)驗(yàn)時(shí)可以摸索變性時(shí)間、變性溫度等參數(shù)以獲得佳條件。

如使用熱變性方法，可在雜交時(shí)將探針的變性和樣品DNA變性同步進(jìn)行：將樣品和探針溶液加蓋蓋玻片，置于烘箱80℃變性，染色體DNA樣品處理2min，后冷卻至37℃進(jìn)行雜交。組織樣品DNA的變性時(shí)間可增加至80℃10min。

肝纖維化動(dòng)物模型化學(xué)性損傷法：

雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用腹腔內(nèi)注射，次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。

評(píng)價(jià):第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細(xì)胞變性壞死和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，炎細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死細(xì)胞數(shù)和程度超過(guò)豬模型。6周后出現(xiàn)纖維束，纖維晚于和少于豬模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。

肝纖維化動(dòng)物模型特點(diǎn)：

①肝纖維化出現(xiàn)早，出現(xiàn)率高；

②動(dòng)物整體損傷輕微，毛發(fā)、生長(zhǎng)情況正常；

③纖維化組織中大量膠原，Ⅲ、Ⅳ型前膠原mRNA增多。

慢性活動(dòng)性患者循環(huán)復(fù)合物多為陽(yáng)性，豬模型可用于慢性所致肝纖維化的研究，對(duì)于研究復(fù)合物的形成，沉積和清除及對(duì)于防治損傷性肝纖維化有效的篩選，具有意義。

（IDA）發(fā)生的主要原因是由于鐵的攝入不足和/或鐵丟失過(guò)多，引起機(jī)體血紅蛋白合成障礙導(dǎo)

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、雞、貓、狗、猴等，其中以大鼠為常用。

動(dòng)物模型方法：

1. 給予低鐵飲食。飼料含鐵量≥50mg/kg能滿足大鼠的基本需要，低鐵飼料的鐵含量≤10mg/kg，標(biāo)準(zhǔn)飼

料鐵含量為220-270mg/kg。飼料配方以酪蛋白或脫脂奶粉作為蛋白來(lái)源，玉米淀粉或蔗糖作為碳水化合物來(lái)源，加入植物油，混合維生素和混合無(wú)機(jī)鹽配制。

近來(lái)通過(guò)絡(luò)合劑1%EDTA-2Na除去國(guó)產(chǎn)飼料中的鐵，取得滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2. 給動(dòng)物逐次少量放血，造成鐵的慢性丟失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起鐵的丟失，而且還可以引起其它營(yíng)養(yǎng)素的丟失；另一方面剪尾易

引起動(dòng)物而。

3. 低鐵飲食輔以定期少量放血。