武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測(cè)
動(dòng)物組織原位雜交電話-浙江動(dòng)物組織原位雜交電話
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原位雜交試驗(yàn)
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí),用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時(shí)后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗,然后換成甲9醇,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng),可阻斷色素的形成)
原位雜交技術(shù)基本原理
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有放6射性或非放6射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。
為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。
總的來說,隨探針濃度增加,雜交率也增加。另外,在較窄的范圍內(nèi),隨探針濃度增加,敏感性增加。依我們的經(jīng)驗(yàn),要獲得較滿意的敏感性,膜雜交中32P標(biāo)記探針與非放0射性標(biāo)記探針的用量分別為5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位雜交中,無論應(yīng)用何種標(biāo)記探針,其用量均為0.5~5.0μg/ml。探針的任何內(nèi)在物理特性均不影響其使用濃度,但受不同類型標(biāo)記物的固相支持物的非特異結(jié)合特性的影響。