武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營:動植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實驗
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
目的:分析增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)與蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)、亞細(xì)胞定位及其對細(xì)胞形態(tài)的影響。方法:用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染胺(Lipofec-tAMINE 2000)為載體分別以Cθ-EGFP和pEGFP-N1轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分析其表達(dá)率,激...
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
重金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-type ATPase(HMA)已被證實參與植物體內(nèi)的重金屬運(yùn)輸,HMA5主要參與銅的轉(zhuǎn)運(yùn)。在模式植物擬南芥、水稻和黃瓜中對HMA5基因進(jìn)行了較多的研究,但是對豆科植物HMA5的研究鮮見報道。實驗室前期在天藍(lán)苜蓿中分離到一個與銅脅迫及共生結(jié)瘤相關(guān)的HMA5基因,為了對此類基因在豆科植物共生結(jié)瘤中的作用進(jìn)行深入研究,本研究對全基因組已測序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的基因組進(jìn)行篩查,尋找HMA5同源基因并通過表達(dá)模式分析初步判斷其與共生結(jié)瘤的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上,以其中的MTR_8g079250基因為對象,進(jìn)行亞細(xì)胞定位、組織表達(dá)、RNA干擾和過量表達(dá)等研究,初步鑒定該基因在共生結(jié)瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亞細(xì)胞定位構(gòu)建MTR_8g079250的洋蔥表皮亞細(xì)胞定位載體,通過基因槍轟擊轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,在激光共聚焦顯微鏡下觀察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在細(xì)胞膜上表達(dá),在細(xì)胞核上也有微量的表達(dá);構(gòu)建MTR_8g079250的葉片亞細(xì)胞定位載體,通過根癌農(nóng)介導(dǎo)注射葉片的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化,結(jié)果表明目的基因主要定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上;2、MTR_8g079250的組織表達(dá)構(gòu)建PMTR_8g079250::GUS融合表達(dá)載體,通過農(nóng)發(fā)根轉(zhuǎn)化的方式轉(zhuǎn)入蒺藜苜蓿根部,經(jīng)培養(yǎng)后,進(jìn)行GUS染色觀察。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
F-box蛋白通過在UPP(泛素-蛋白酶體途徑)中特異識別底物蛋白而參與細(xì)胞周期調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命活動。很多研究結(jié)果表明F-box蛋白通過SCF復(fù)合體調(diào)節(jié)多種的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,如IAA、JA、GA和乙烯的信號傳導(dǎo),并且與植物對非生物脅迫的響應(yīng)有很大的關(guān)系。故其對植物抗逆性研究有重要意義。鷹嘴豆是世界第三大豆類作物,主要生長在干旱和半干旱地區(qū)。它具有生育期短,基因組小的特點。經(jīng)過長時間的進(jìn)化和對不良環(huán)境的適應(yīng),鷹嘴豆具有了豐富的耐旱、耐低溫和耐鹽堿等抗逆基因,因此具有其自身的優(yōu)勢來研究植物的抗逆機(jī)制。目前,鷹嘴豆在分子生物學(xué)方面的研究較為少。 本研究從EST庫中挑選到兩個F-box蛋白基因在干旱脅迫下表達(dá),采用RACE技術(shù)其全長,并對目的基因進(jìn)行了初步的生物信息學(xué)分析和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)譜分析,旨在為進(jìn)一步揭示鷹嘴豆F-box蛋白在植物的生長發(fā)育及在逆境信號傳導(dǎo)中的作用奠定理論基礎(chǔ)。 CarF-box1基因的開放閱讀框(ORF)長1093bp,編碼一條345個氨基酸殘基的多肽,含有F-box結(jié)構(gòu)域和Kelch結(jié)構(gòu)域。其理論等電點為5.38,分子量為38.37kDa。CarF-box1基因不含有內(nèi)含子。熒光定量PCR分析表明,CarF-box1在鷹嘴豆的根、莖、葉、花、成熟豆和成熟莢中均有表達(dá),在花中表達(dá)極高。